單克隆抗體是現(xiàn)代生命科學(xué)研究的重要工具，為許多領(lǐng)域的發(fā)展作出了不可估量的貢獻(xiàn)。隨著PCR技術(shù)和單克隆抗體技術(shù)的發(fā)展和成熟，單個(gè)B細(xì)胞抗體制備技術(shù)迅速興起。該技術(shù)能夠?qū)蝹€(gè)的抗原特異性B細(xì)胞進(jìn)行抗體基因的體外克隆和表達(dá)，保證了輕重鏈可變區(qū)的天然配對(duì)，相較于傳統(tǒng)的抗體制備技術(shù)具有效率高、全人源、基因多樣性更豐富等優(yōu)勢(shì)，在病原微生物感染、腫瘤、自身免疫性疾病和器官移植等方面顯出了獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)和良好的應(yīng)用前景。目前單個(gè)B細(xì)胞抗體制備技術(shù)已廣泛應(yīng)用于以下幾方面。

病原微生物感染
如噬菌體展示技術(shù)、雜交瘤技術(shù)等抗體制備技術(shù)只能研究有限種類的B細(xì)胞，而單個(gè)B細(xì)胞抗體制備技術(shù)幫助人們?cè)诓∪烁腥净蛎庖邘讉€(gè)月甚至多年后仍然能夠快速分離到記憶B細(xì)胞制備單抗，與此同時(shí)人們能夠從基因水平更加深人了解和闡釋人類免疫系統(tǒng)機(jī)制。單個(gè)B細(xì)胞技術(shù)已用于制備抵抗病原微生物感染的高度特異性人源抗體，如HIV抗體、破傷風(fēng)抗體、乙肝抗體、流感抗體等。
Morris等研究人員從HIV-1疫苗接種者外周血中分離單個(gè)B細(xì)胞并克隆得到能識(shí)別HIV-1gp41保守位點(diǎn)且中和多株HIV-1的抗體，并研究得出結(jié)論在HIV-gp41包被蛋白的C端存在多免疫原性靶點(diǎn)，為HIV-1疫苗設(shè)計(jì)提供幫助。
Wrammert等通過(guò)單個(gè)B細(xì)胞抗體制備技術(shù)，從H1N1感染患者外周血中成功制備了針對(duì)H1N1病毒基因保守區(qū)的中和性抗體，動(dòng)物保護(hù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)用于測(cè)試的具有代表性的3株抗體在小鼠感染H1N1后70后仍然都能起到保護(hù)作用，并且3株抗體能抵抗絕大多數(shù)HIN1、H5N1病毒株。
Liao等研究人員從單個(gè)B細(xì)胞中擴(kuò)增流感抗體基因，將其連接至線性表達(dá)框并直接轉(zhuǎn)化到哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)，僅用6d從分選的24個(gè)細(xì)胞中擴(kuò)增出9對(duì)完整的抗體基因并表達(dá)，并成功篩選到5個(gè)高親和力人流感單克降抗體。
Jin等研究人員通過(guò)聯(lián)免疫斑點(diǎn)微陣列芯片分選法，僅用7d同時(shí)從一批人外周血中分別篩選出63個(gè)流感特異性抗體分泌B細(xì)胞和104個(gè)肝特異性抗體分泌B細(xì)胞，從中成功制備了19株流感和45株乙肝中和性單克隆抗體。因此單個(gè)B細(xì)胞抗體制備技術(shù)能夠高效高通量制備高親和力人單克隆抗體。

自身免疫疾病
在腫瘤檢測(cè)和治療方面，單個(gè)B細(xì)胞技術(shù)同樣發(fā)揮著其他技術(shù)難以比肩的重大作用。Wang等研究人員通過(guò)該技術(shù)發(fā)現(xiàn)表現(xiàn)為葡萄膜炎癥狀的玻璃體視網(wǎng)膜淋巴瘤患者的IgH基因和T細(xì)胞受體(TCR)基因重排，以此建立了一種新型的高靈敏度高特異性的初期玻璃體視網(wǎng)膜淋巴瘤檢測(cè)方法。Gilbert等研究人員在單個(gè)B細(xì)胞技術(shù)的基礎(chǔ)上建立了新型的基于細(xì)胞ELISA(Cell-basedELISA)得到對(duì)黑色素瘤細(xì)胞具有殺傷作用的抗黑色素瘤抗體，同時(shí)發(fā)現(xiàn)該抗體在黑色素瘤患者體內(nèi)含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其在正常人體內(nèi)的含量。

人類免疫系統(tǒng)研究
單個(gè)B細(xì)胞抗體制備技術(shù)最突出的應(yīng)用在于治療和研究自身免疫性疾病和人類免疫系統(tǒng)。單個(gè)B細(xì)胞抗體制備技術(shù)能夠分離到人體內(nèi)任意時(shí)期的B細(xì)胞，使得詳細(xì)深入地研究人體免疫系統(tǒng)各個(gè)階段功能和機(jī)理成為可能。
Scheel等研究人員發(fā)現(xiàn)在風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者滑液組織中存在持續(xù)激活特定B細(xì)胞的現(xiàn)象，使得滑液組織處大量漿細(xì)胞富集，由此得出結(jié)論認(rèn)為出現(xiàn)淋巴細(xì)胞滲入情況的關(guān)節(jié)炎患者，可通過(guò)早期B細(xì)胞排除治療法減輕漿細(xì)胞堆積的癥狀。
Wardemann等研究人員從健康人體內(nèi)克隆出單個(gè)B細(xì)胞抗體基因并對(duì)此進(jìn)行分析和研究發(fā)現(xiàn)，骨髓中初期生成的大部分B細(xì)胞都具有自身免疫特異性，從而推論在抗體發(fā)生過(guò)程中可能存在兩個(gè)排除自身免疫的檢查點(diǎn)：一個(gè)位于骨髓，另一個(gè)位于B細(xì)胞發(fā)生免疫耐受的外周組織。

單個(gè)B細(xì)胞技術(shù)具有效率高、全人源、基因多樣性更豐富等優(yōu)勢(shì)。在過(guò)去十年里，單個(gè)B細(xì)胞抗體制備技術(shù)已經(jīng)成為制備人源抗體的熱門方法，同時(shí)也促進(jìn)了包括抗體發(fā)生成熟、疫苗保護(hù)機(jī)制、疫苗開(kāi)發(fā)、腫瘤及自身免疫疾病等免疫學(xué)相關(guān)研究。隨著B細(xì)胞分選技術(shù)、后續(xù)PCR擴(kuò)增基因方法以及抗體基因高通量分析鑒定等方法的成熟和完善，未來(lái)單個(gè)B細(xì)胞抗體制備技術(shù)將在診斷、藥效學(xué)及臨床應(yīng)用中發(fā)揮前所未有的重大作用，引領(lǐng)新型治療性抗體研究的嶄新時(shí)代。


參考文獻(xiàn)
XiangyangChi,ChangmingYu,WeiChen.SingleBcellmonoclonalantibodytechnologiesandapplications.[J].ChineseJournalofBiotechnology,2012,28(6):651~660